gb18466-2005《医疗机构水污染物排放标准》 55页

专业技术资料分享本电子版内容如与中国环境出版社出版的标准文本有出入，以中国环境出版社出版的文本为准。中华人民共和国国家标准GB18466-2005医疗机构水污染物排放标准Dischargestandardofwaterpollutantsformedicalorganization2005－07－27发布2006－01－01实施WORD文档下载可编辑专业技术资料分享国家环境保护总局国家质量监督检验检疫总局发布WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享目录前言...............................................................................................................................II1范围.....................................................................................................................................12规范性引用文件.................................................................................................................13术语和定义.........................................................................................................................14技术内容.............................................................................................................................14.1污水排放要求..............................................................................................................................14.2废气排放要求..............................................................................................................................44.3污泥控制与处置..........................................................................................................................45处理工艺与消毒要求.........................................................................................................46取样与监测.........................................................................................................................56.1污水取样与监测..........................................................................................................................56.2大气取样与监测..........................................................................................................................76.3污泥取样与监测..........................................................................................................................77标准的实施与监督.............................................................................................................7附录A.............................................................................................................................................8附录B...........................................................................................................................................15附录C...........................................................................................................................................19附录D...........................................................................................................................................21附录E............................................................................................................................................23附录F............................................................................................................................................25WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享IWORD文档下载可编辑 专业技术资料分享前言WORD文档下载可编辑专业技术资料分享为贯彻《中华人民共和国环境保护法》、《中华人民共和国水污染防治法》、《中华人民共和国海洋环境保护法》、《中华人民共和国大气污染防治法》、《中华人民共和国传染病防治法》，加强对医疗机构污水、污水处理站废气、污泥排放的控制和管理，预防和控制传染病的发生和流行，保障人体健康，维护良好的生态环境，制定本标准。本标准规定了医疗机构污水及污水处理站产生的废气和污泥的污染物控制项目及其排放限值、处理工艺与消毒要求、取样与监测和标准的实施与监督等。本标准自实施之日起，代替GB8978-1996《污水综合排放标准》中有关医疗机构水污染物排放标准部分，并取代GB18466-2001《医疗机构污水排放要求》。新、扩、改医疗机构自本标准实施之日起按本标准实施管理，现有医疗机构在2007年12月31日前达到本标准要求。本标准的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E和附录F为规范性附录。本标准为首次发布。本标准由国家环境保护总局科技标准司提出并归口。本标准委托北京市环境保护科学研究院和中国疾病预防控制中心起草。本标准由国家环境保护总局2005年07月27日批准。本标准由国家环境保护总局负责解释。WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享IIWORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享1范围医疗机构水污染物排放标准WORD文档下载可编辑专业技术资料分享本标准规定了医疗机构污水、污水处理站产生的废气、污泥的污染物控制项目及其排放和控制限值、处理工艺和消毒要求、取样与监测和标准的实施与监督。本标准适用于医疗机构污水、污水处理站产生污泥及废气排放的控制，医疗机构建设项目的环境影响评价、环境保护设施设计、竣工验收及验收后的排放管理。当医疗机构的办公区、非医疗生活区等污水与病区污水合流收集时，其综合污水排放均执行本标准。建有分流污水收集系统的医疗机构，其非病区生活区污水排放执行GB8978的相关规定。2规范性引用文件下列标准和本标准表5、表6所列分析方法标准及规范所含条文在本标准中被引用即构成为本标准的条文，与本标准同效。当上述标准和规范被修订时，应使用其最新版本。GB8978污水综合排放标准GB3838地表水环境质量标准GB3097海水水质标准GB16297大气污染物综合排放标准HJ/T55大气污染物无组织排放监测技术导则HJ/T91地表水和污水检测技术规范3术语和定义本标准采用下列定义。3.1医疗机构medicalorganization指从事疾病诊断、治疗活动的医院、卫生院、疗养院、门诊部、诊所、卫生急救站等。3.2医疗机构污水medicalorganizationwastewater指医疗机构门诊、病房、手术室、各类检验室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平间等处排出的诊疗、生活及粪便污水。当医疗机构其他污水与上述污水混合排出时一律视为医疗机构污水。3.3污泥sludge指医疗机构污水处理过程中产生的栅渣、沉淀污泥和化粪池污泥。3.4废气wastegas指医疗机构污水处理过程中产生的有害气体。4技术内容4.1污水排放要求4.1.1传染病和结核病医疗机构污水排放执行表1的规定。4.1.2县级及县级以上或20张床位及以上的综合医疗机构和其他医疗机构污水排放执行表2WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享1WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享的规定。直接或间接排入地表水体和海域的污水执行排放标准，排入终端已建有正常运行城镇二级污水处理厂的下水道的污水，执行预处理标准。4.1.3县级以下或20张床位以下的综合医疗机构和其他所有医疗机构污水经消毒处理后方可排放。4.1.4禁止向GB3838I、II类水域和III类水域的饮用水保护区和游泳区，GB3097一、二类海域直接排放医疗机构污水。4.1.5带传染病房的综合医疗机构，应将传染病房污水与非传染病房污水分开。传染病房的污水、粪便经过消毒后方可与其他污水合并处理。4.1.6采用含氯消毒剂进行消毒的医疗机构污水，若直接排入地表水体和海域，应进行脱氯处理，使总余氯小于0.5mg/L。表1传染病、结核病医疗机构水污染物排放限值（日均值）WORD文档下载可编辑专业技术资料分享序号12345PH67891011121314151617181920控制项目粪大肠菌群数（MPN/L）肠道致病菌肠道病毒结核杆菌化学需氧量（COD）浓度（mg/L）最高允许排放负荷（g/床位）生化需氧量（BOD）浓度（mg/L）最高允许排放负荷（g/床位）悬浮物（SS）浓度（mg/L）最高允许排放负荷（g/床位）氨氮（mg/L）15动植物油（mg/L）5石油类（mg/L）5阴离子表面活性剂（mg/L）色度（稀释倍数）30挥发酚（mg/L）0.5总氰化物（mg/L）总汞（mg/L）0.05总镉（mg/L）0.1总铬（mg/L）1.5六价铬（mg/L）0.5总砷（mg/L）0.5标准值不得检出不得检出不得检出6-96060202020200.52WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享1005WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享2122232425总铅（mg/L）1.0总银（mg/L）0.5总Α(Bq/L)1总Β(Bq/L)10总余氯1）2（mg/L）（直接排入水体的要求）0.5WORD文档下载可编辑专业技术资料分享注：1）采用含氯消毒剂消毒的工艺控制要求为：消毒接触池的接触时间≥1.5h，接触池出口总余氯6.5-10mg/L。2）采用其他消毒剂对总余氯不作要求。表2综合医疗机构和其他医疗机构水污染物排放限值（日均值）WORD文档下载可编辑专业技术资料分享序号1234pH567891011控制项目粪大肠菌群数（MPN/L）肠道致病菌肠道病毒化学需氧量（COD）浓度（mg/L）最高允许排放负荷（g/床位）生化需氧量（BOD）浓度（mg/L）最高允许排放负荷（g/床位）悬浮物（SS）浓度（mg/L）最高允许排放负荷（g/床位）氨氮（mg/L）动植物油（mg/L）石油类（mg/L）阴离子表面活性剂（mg/L）排放标准不得检出不得检出6-9606020202020预处理标准5006-92502501001006060-20205155--510WORD文档下载可编辑专业技术资料分享12色度（稀释倍数）-30WORD文档下载可编辑专业技术资料分享13挥发酚（mg/L）1.00.5WORD文档下载可编辑专业技术资料分享14总氰化物（mg/L）0.50.5WORD文档下载可编辑专业技术资料分享15161718总汞（mg/L）总镉（mg/L）总铬（mg/L）六价铬（mg/L）0.050.11.50.50.050.11.50.5WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享3WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享192021222324总砷（mg/L）总铅（mg/L）总银（mg/L）总Α(Bq/L)1总Β(Bq/L)10总余氯1）2）（mg/L）0.51.00.5110-0.50.51.00.5WORD文档下载可编辑专业技术资料分享注：1）采用含氯消毒剂消毒的工艺控制要求为：一级标准：消毒接触池接触时间≥1h，接触池出口总余氯3-10mg/L。二级标准：消毒接触池接触时间≥1h，接触池出口总余氯2-8mg/L。2）采用其他消毒剂对总余氯不作要求。4.2废气排放要求4.2.1污水处理站排出的废气应进行除臭除味处理，保证污水处理站周边空气中污染物达到表3要求。4.2.2传染病和结核病医疗机构应对污水处理站排出的废气进行消毒处理。表3污水处理站周边大气污染物最高允许浓度WORD文档下载可编辑专业技术资料分享序号12345控制项目氨（mg/m3）1.0硫化氢（mg/m3）0.03臭气浓度（无量纲）10氯气（mg/m3）0.1甲烷（指处理站内最高体积百分数%）标准值1%WORD文档下载可编辑专业技术资料分享4.3污泥控制与处置4.3.1栅渣、化粪池和污水处理站污泥属危险废物，应按危险废物进行处理和处置。4.3.2污泥清淘前应进行监测，达到表4要求。表4医疗机构污泥控制标准WORD文档下载可编辑专业技术资料分享医疗机构类别粪大肠菌群数(MPN/g)肠道致病菌肠道病毒结核杆菌蛔虫卵死亡率（%）WORD文档下载可编辑专业技术资料分享传染病医疗机构结核病医疗机构综合医疗机构和其它医疗机构5处理工艺与消毒要求≤100≤100≤100不得检出--不得检出---不得检出->95>95>95WORD文档下载可编辑专业技术资料分享5.1医疗机构病区和非病区的污水，传染病区和非传染病区的污水应分流，不得将固体传染性废物、各种化学废液弃置和倾倒排入下水道。WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享4WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享5.2传染病医疗机构和综合医疗机构的传染病房应设专用化粪池，收集经消毒处理后的粪便排泄物等传染性废物。5.3化粪池应按最高日排水量设计，停留时间为24-36h。清掏周期为180-360d。5.4医疗机构的各种特殊排水应单独收集并进行处理后，再排入医院污水处理系统。5.4.1低放射性废水应经衰变池处理。5.4.2洗相室废液应回收银，并对废液进行处理。5.4.3口腔科含汞废水应进行除汞处理。5.4.4检验室废水应根据使用化学品的性质单独收集，单独处理。5.4.5含油废水应设置隔油池处理。5.5传染病医疗机构和结核病医疗机构污水处理宜采用二级处理+消毒工艺或深度处理+消毒工艺。5.6综合医疗机构污水排放执行排放标准时，宜采用二级处理+消毒工艺或深度处理+消毒工艺；执行预处理标准时宜采用一级处理或一级强化处理+消毒工艺。5.7消毒剂应根据技术经济分析选用，通常使用的有：二氧化氯、次氯酸钠、液氯、紫外线和臭氧等。采用含氯消毒剂时按表1、表2要求设计。5.7.1采用紫外线消毒，污水悬浮物浓度应小于10mg/L，照射剂量30-40mJ/cm2,照射接触时间应大于10s或由试验确定。5.7.2采用臭氧消毒，污水悬浮物浓度应小于20mg/L，臭氧用量应大于10mg/L,接触时间应大于12min或由试验确定。6取样与监测6.1污水取样与监测6.1.1应按规定设置科室处理设施排出口和单位污水外排口，并设置排放口标志。6.1.2表1第16-22项，表2第15-21项在科室处理设施排出口取样，总Α、总Β在衰变池出口取样监测。其它污染物的采样点一律设在排污单位的外排口。6.1.2医疗机构污水外排口处应设污水计量装置，并宜设污水比例采样器和在线监测设备。6.1.3监测频率6.1.3.1粪大肠菌群数每月监测不得少于1次。采用含氯消毒剂消毒时，接触池出口总余氯每日监测不得少于2次（采用间歇式消毒处理的，每次排放前监测）。6.1.3.2肠道致病菌主要监测沙门氏菌、志贺氏菌。沙门氏菌的监测，每季度不少于1次；志贺氏菌的监测，每年不少于2次。其他致病菌和肠道病毒按6.1.3.3规定进行监测。结核病医疗机构根据需要监测结核杆菌。6.1.3.3收治了传染病病人的医院应加强对肠道致病菌和肠道病毒的监测。同时收治的感染上同一种肠道致病菌或肠道病毒的甲类传染病病人数超过5人、或乙类传染病病人数超过10人、或丙类传染病病人数超过20人时，应及时监测该种传染病病原体。6.1.3.4理化指标监测频率：pH每日监测不少于2次，COD和SS每周监测1次，其他污染物每季度监测不少于1次。WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享5WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享6.1.3.5采样频率：每4小时采样1次，一日至少采样3次，测定结果以日均值计。6.1.4监督性监测按HJ/T91执行。6.1.5监测分析方法按表5和附录。6.1.6污染物单位排放负荷计算见附录F。表5水污染物监测分析方法WORD文档下载可编辑专业技术资料分享序号123456789控制项目粪大肠菌群数沙门氏菌志贺氏菌结核杆菌总余氯化学需氧量(COD)生化需氧量(BOD)悬浮物(SS)氨氮测定方法多管发酵法N,N-二乙基-1,4-苯二胺分光光度法N,N-二乙基-1,4-苯二胺滴定法重铬酸盐法稀释与接种法重量法蒸馏和滴定法测定下限（mg/L）方法来源附录A附录B附录C附录EGB11898GB11897GB1191430GB74882GB119010.2GB7478GB7479WORD文档下载可编辑专业技术资料分享1011动植物油石油类比色法红外光度法红外光度法0.05GB/T164880.1GB/T164880.1WORD文档下载可编辑专业技术资料分享12阴离子表面活性剂亚甲蓝分光光度法GB74940.05WORD文档下载可编辑专业技术资料分享13色度稀释倍数法GB11903WORD文档下载可编辑专业技术资料分享14pH值15总汞玻璃电极法冷吸收分光光度法双硫腙分光光度法0.00010.002GB6920GB7468GB7469WORD文档下载可编辑专业技术资料分享16挥发酚蒸馏后4-氨基安替比林分光光度法硝酸银滴定法0.002GB74900.25GB7486WORD文档下载可编辑专业技术资料分享1718总氰化物总镉异烟酸-吡唑啉酮比色法吡啶-巴比妥酸比色法原子吸收分光光度法（螯合萃取法）双硫腙分光光度法0.0040.0020.0010.001GB7486GB7486GB7475GB7471WORD文档下载可编辑专业技术资料分享19202122232425总铬六价铬总砷总铅总银总Α总Β高锰酸钾氧化－二苯碳酰二肼分光光度法二苯碳酰二肼分光光度法二乙基二硫代氨基甲酸银分光光度法原子吸收分光光度法（螯合萃取法）双硫腙分光光度法火焰原子吸收分光光度法镉试剂2B分光光度法厚源法蒸发法0.004GB74660.0040.007GB74850.01GB74750.01GB74700.03GB1190790.01GB11908EJ/T10750.05Bq/LEJ/T900WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享6WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享6.2大气取样与监测6.2.1污水处理站大气监测点的布置方法与采样方法按GB16297中附录C和HJ/T55的有关规定执行。6.2.2采样频率，每2h采样一次，共采集4次，取其最大测定值。每季度监测一次。6.2.3监测分析方法按表6。表6大气污染物监测分析方法WORD文档下载可编辑专业技术资料分享序号12345控制项目氨硫化氢臭气浓度（无量纲）氯气甲烷测定方法次氯酸钠-水杨酸分光光度法气相色谱法三点比较式臭袋法甲基橙分光光度法气相色谱法方法来源GB/T14679GB/T14678GB/T14675HJ/T30CJ/3037WORD文档下载可编辑专业技术资料分享6.3污泥取样与监测6.3.1取样方法，采用多点取样，样品应有代表性，样品重量不小于1kg。清掏前监测。6.3.2监测分析方法见附录A、附录B、附录C、附录D和附录E。7标准的实施与监督7.1本标准由县级以上人民政府环境保护行政主管部门负责监督实施。7.2省、自治区、直辖市人民政府对执行本标准不能达到本地区环境功能要求时，可以根据总量控制要求和环境影响评价结果制定严于本标准的地方污染物排放标准。WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享7WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享A1仪器和设备附录A（规范性附录）医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群的检验方法WORD文档下载可编辑专业技术资料分享A1.1高压蒸汽灭菌器。A1.2干燥灭菌箱。A1.3培养箱：37℃。A1.4恒温水浴箱。A1.5电炉。A1.6天平。A1.7灭菌平皿。A1.8灭菌刻度吸管。A1.9酒精灯A2培养基和试剂A2.1乳糖胆盐培养液A2.1.1成分蛋白胨20g猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g乳糖5g0.4％溴甲酚紫水溶液2.5mL蒸馏水1000mLA2.1.2制法将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于1000mL蒸馏水中，调整pH到7.4，加入指示剂，充分混匀，分装于内有倒管的试管中。115℃下灭菌20min。贮存于冷暗处备用。A2.2三倍浓度乳糖胆盐培养液A2.2.1成分蛋白胨60g猪胆盐（或牛、羊胆盐）15g乳糖15g0.4％溴甲酚紫水溶液7.5mL蒸馏水1000mLA2.2.2制法制法同附录A2.1.2。A2.3伊红美兰培养基（EMB培养基）A2.3.1成分蛋白胨10g乳糖10g磷酸氢二钾2g琼脂20g2％伊红水溶液20mL0.5％美蓝水溶液13mLWORD文档下载可编辑 专业技术资料分享8WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享蒸馏水1000mLA2.3.2制法将琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾和蛋白胨，混匀使溶解，再加入蒸馏水补足至1000mL，调整pH至7.2～7.4。趁热用脱脂棉和砂布过滤，再加入乳糖，混匀，定量分装于烧瓶内，115℃灭菌20min。作为储备培养基贮存于冷暗处备用。临用时，加热融化储备培养基，待冷至60℃左右，根据烧瓶内培养基的容量，加入一定量的已灭菌的2％伊红水溶液和0.5％美蓝水溶液，充分摇匀（防止产生气泡）。倾注平皿备用。A2.4乳糖蛋白胨培养液A2.4.1成分蛋白胨10g牛肉膏3g乳糖5g氯化钠5g1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1mL蒸馏水1000mLA2.4.2制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调整pH到7.2～7.4，加入1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于内有倒管的试管中。115℃下灭菌20min。贮存于冷暗处备用。A2.5革兰氏染色液A2.5.1结晶紫染色液结晶紫1g95％乙醇溶液20mL1％草酸铵水溶液1000mL将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵水溶液混合。A2.5.2革兰氏碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾混合，加入蒸馏水少许，充分摇匀，待完全溶解，再加入蒸馏水至300mL。A2.5.3脱色液95％乙醇。A2.5.4沙黄复染液沙黄1g95％乙醇2g蒸馏水90mL将沙黄溶于95％乙醇中，然后用蒸馏水稀释。A2.6染色法染色的基本步骤为：1）涂片：在载玻片上滴加一滴生理盐水，用灭菌的接种环取菌落少许，与生理盐水混匀，涂布成薄膜；2）干燥：在室温中使自然干燥；3）固定：将涂片迅速通过火焰2～3次，以载玻片反面接触皮肤，热而不烫为度；4）染色：滴加结晶紫染色液，染色1min，水洗；5）媒染：滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗；6）脱色：滴加95％乙醇脱色，约30s，水洗；7）复染：滴加复染液，复染1min，水洗。WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享9WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享革兰氏阳性菌染色后呈紫色，革兰氏阴性菌染色后呈红色。注：亦可用1：10稀释的石炭酸复红染色液作复染剂，复染时间为10s。A3检验程序检验程序见图A.样品处理：确定样品接种量发酵试验：将样品接种于乳糖胆盐培养液44℃、培养24h平板分离：将产酸发酵管液接种于EMB37℃、培养18～24h鉴定：挑取可疑菌落革兰氏染色、镜检鉴定：挑取革兰氏阴性无芽孢杆菌接种于乳糖蛋白胨培养液44℃、培养24h计数：根据产酸产气的阳性管数查MPN表检验结果报告图A污水、污泥中粪大肠菌群检验程序A4操作步骤A4.1样品准备A4.1.1污水污水样品应至少取200mL，使用前应充分混匀。根据预计的污水样品中粪大肠菌群数确定污水样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的接种量一般为10mL、1mL、0.1mL。粪大肠菌群数较多时接种量为1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。接种量少于1mL时，水样应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量为0.1mL、0.01mL时，取稀释比分别为1:10、1:100。其它接种量的稀释比依此类推。1:10稀释样品的制作方法为：吸取1mL水样，注入到盛有9mL灭菌水的试管中，混匀，制成1:10稀释样品。因此，取1mL1:10稀释样品，等于取0.1mL污水样品。其它稀释比的稀释样品同法制作。注1：若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。A4.1.2污泥污泥样品应至少取200g，使用前应充分混匀。WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享10WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享根据预计的污泥样品中粪大肠菌群数量确定污泥样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的污泥样品接种量一般为0.1g、0.01g、0.001g。粪大肠菌群数量较多时接种量为0.01g、0.001g、0.0001g或0.001g、0.0001g、0.00001g等。污泥样品应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量0.1g、0.01g、0.001g的稀释样品制作方法如下：取20g污泥样品，加入到三角烧瓶中，加灭菌水使成200mL，混匀，制成1:10稀释样品。吸取1:10稀释样品1mL，注入到盛有9mL灭菌水的试管中，混匀，制成1:100稀释样品。按同法制成1:1000稀释样品。接种1mL1:10、1:100、1:1000稀释样品等于接种0.1g、0.01g、0.001g污泥样品。注1：若样品为经过氯消毒的污泥，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。A4.2发酵试验将样品接种于装有乳糖胆盐培养液的试管（内有小倒管）中，44℃培养24h。样品接种体积以及管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积根据以下条件确定：样品为污水时，取三个接种量、每个接种量的样品分别接种于5个试管内，共需15个试管。试管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积应根据接种量确定。若接种量为10mL，吸取10mL样品接种于装有5mL三倍浓度乳糖胆盐培养液的试管内；若接种量为1mL时，吸取1mL样品接种于装有10mL普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内；若接种量少于1mL时，吸取1mL稀释样品接种于装有10mL普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内。样品为污泥时，取三个接种量、每个接种量的稀释样品分别接种于3个试管内，共需9个试管。9个试管中，各装有10mL乳糖胆盐培养液。各个试管接种稀释样品体积均为1mL。A4.3平板分离大肠杆菌分解乳糖产酸时培养液变色、产气时小倒管内出现气泡。经24h培养后，将产酸的试管内培养液分别划线接种于EMB培养基上。置于37℃培养箱中，培养18～24h。A4.4鉴定挑选可疑粪大肠菌群菌落，进行革兰氏染色和镜检。可疑菌落有：1）深紫黑色，具有金属光泽的菌落；2）紫黑色，不带或略带金屑光泽的菌落；3）淡紫红色，中心色较深的菌落。上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取上述典型菌落1～3个接种于盛有5mL乳糖蛋白胨培养液倒管和倒管的试管内，置于44℃培养箱中培养24h。产酸产气试管为粪大肠菌群阳性管。A5计数根据证实有粪大肠菌群存在的阳性管数，查表A1或A2可得100mL污水或1g污泥中粪大肠菌群MPN值。由于表A1和表A2是按一定的三个10倍浓度差接种量设计的（污水接种量为10mL、1mL和0.1mL，污泥接种量为0.1g、0.01g和0.001g），当采用其他三个10倍浓度差接种量时，需要修正表内MPN值，具体方法如下：表内所列污水（污泥）最大接种量增加10倍时表内MPN值相应降低10倍；污水（污泥）最大接种量减少10倍时表内MPN值相应增加10倍。如污水接种量改为1mL、0.1mL和0.01mL时，A1表内MPN值相应增加10倍。其它的三个10倍浓度差接种量的MPN值相应类推。由于A1表内MPN值的单位为每100mL污水样品中MPN值，而污水以1L为报告单位，因此需将查A1表得到的MPN值乘上10，换算成1L污水样品中的MPN值。WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享11WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享接种表A1污水中粪大肠菌群最可能数（MPN）检索表（污水样品接种量为5份10mL水样，5份1mL水样和5份0.1mL水样）阳性管数每阳性管数每阳性管数接种接种100mL接种接种接种100mL接种接种接种每100mLWORD文档下载可编辑专业技术资料分享100mL水样10mL水样0.1mL水样水样中MPN100mL水样10mL水样0.1mL水样水样中MPN100mL水样10mL水样0.1mL水样水样中MPNWORD文档下载可编辑专业技术资料分享000020054001300122017401170024202940221003520312403250047204144043000592051640536010221074101701142119411210126212124122601372131411331014921417414360151121519415420204220942022021622112421260227222144223202392231742338024112241942444025132252242550030623012430270317231144313303292321743239033112332043345034132342243452035152352543559040824015440340419241174414004211242204424704313243234435404415244254446204517245284456905092501745041051112512045148052132522345256053152532645364054172542945472055192553245581WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享12WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享接种100mL水样阳性管数接种10mL水样接种0.1mL水样每100mL水样中MPN接种100mL水样阳性管数接种10mL水样接种0.1mL水样每100mL水样中MPN接种100mL水样阳性管数接种10mL水样接种0.1mL水样每100mL水样中MPNWORD文档下载可编辑专业技术资料分享100230085002310143011150131102630213502431038303165035810410304205047610512305235059511043101151033111631114511461128312175126311310313205138411412314235141101151431527515130120632014520491218321175217012210322205229412312323245231201241532427524150125173253152518013083301753079131103312153111013212332245321401331533328533180134173343253421013519335365352501401134021540130141133412454117014215342285422201431734332543280144193443654435014522345405454301501335025550240151153512955135015217352325525401531935337553920154223544155416001552435545555>1600WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享13WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享表A2污泥中粪大肠菌群最可能数（MPN）检索表（污泥样品接种量为3份0.1g泥样，3份0.01g泥样和3份0.001g泥样）WORD文档下载可编辑专业技术资料分享接种0.1g污样管阳性管数接种0.01g污样管接种0.001g污样管每1g泥样中MPN接种0.1g污样管阳性管数接种0.01g污样管接种0.001g污样管每1g泥样中MPN接种0.1g污样管阳性管数接种0.01g污样管接种0.001g污样管每1g泥样中MPNWORD文档下载可编辑专业技术资料分享000<31201130023WORD文档下载可编辑专业技术资料分享001312115301390026122203026400391232430395010313016310430116.113120311750129.21322431212001312133293131600206.22009.1320930219.320114321150022122022032221002316203263232900309.421015330240031132112033146003216212273321100WORD文档下载可编辑专业技术资料分享03319213343331003.6220211017.222128102112223510315223421107.323029111112313611215232441131923353A6检验结果报告根据粪大肠菌群MPN值，报告1L污水或1g污泥样品中粪大肠菌群MPN值。>1100WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享14WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享B1仪器和设备B1.1高压蒸汽灭菌器。B1.2干燥灭菌箱。B1.3培养箱。B1.4恒温水浴箱。B1.5电炉。B1.6天平。B1.7灭菌平皿。B1.8灭菌刻度吸管。B1.9酒精灯。B2培养基和试剂附录B(规范性附录)医疗机构污水和污泥中沙门氏菌的检验WORD文档下载可编辑专业技术资料分享B2.1亚硒酸盐增菌液(SF增菌液)B2.1.1成分胰蛋白胨(或多价胨)10g磷酸氢二钠(Na2HPO3)16g磷酸二氢钠(NaH2PO3)2.5g乳糖4g亚硒酸氢钠4g蒸馏水1000mLB2.1.2制法除亚硒酸氢钠外，将以上各成分放入蒸馏水中，加热溶化。再加入亚硒酸氢钠，待完全溶解后，调整pH到7.0～7.1，分装于三角烧杯内。121℃下灭菌15min备用。B2.2二倍浓度亚硒酸盐增菌液(二倍浓度SF增菌液)B2.2.1成分除蒸馏水改为500mL外，其它成分同附录B2.1.1。B2.2.2制法制法同附录B2.1.2。B2.3SS培养基B2.3.1基础培养基B2.3.1.1成分牛肉膏5g示胨5g三号胆盐3.5g琼脂17g蒸馏水1000mLB2.3.1.2制法将牛肉膏、示胨和胆盐溶解于400mL蒸馏水中。将琼脂加到600mL蒸馏水中，煮沸使其溶解。再将二者混合，121℃下灭菌15min，保存备用。B2.3.2完成培养基B2.3.2.1成分基础培养基1000mLWORD文档下载可编辑 专业技术资料分享15WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享乳糖10g柠檬酸钠8.5g硫代硫酸钠8.5g10%柠檬酸铁溶液10mL1%中性红溶液2.5mL0.1%煌绿溶液0.33mLB2.3.2.2制法加热溶化基础培养基，按比例加入除中性红和煌绿溶液以外的各成分，充分混合均匀，调整pH到7.0，加入中性红和煌绿溶液，倾注平板。注：制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于18h内使用。煌绿溶液配好后应在10天以内使用。B2.4亚硫酸铋琼脂培养基（BS培养基）B2.4.1基础培养基B2.4.1.1成分蛋白胨10gWORD文档下载可编辑专业技术资料分享牛肉膏5gWORD文档下载可编辑专业技术资料分享氯化钠5g琼脂20g蒸馏水1000mLB2.4.1.2制法加热溶解各成分，按每份100mL的量分装于250mL三角瓶中，121℃下灭菌20min备用。B2.4.2亚硫酸铋贮备液B2.4.2.1成分柠檬酸铋铵2gWORD文档下载可编辑专业技术资料分享亚硫酸钠20gWORD文档下载可编辑专业技术资料分享磷酸氯二钠10g葡萄糖10g蒸馏水200mLB2.4.2.2制法将柠檬酸铋铵溶解于50mL沸水中，同时将压硫酸钠溶解于100mL沸水中，混合两液并煮沸3min，趁热加入磷酸氯二钠搅拌至溶解。冷却后，加入剩余的50mL葡萄糖水溶液，贮存于冰箱中。B2.4.3柠檬酸铁煌绿贮备液B2.4.3.1成分柠檬酸铁2g煌绿（1％水溶液）25mL蒸馏水200mLB2.4.3.2制法将上述成分溶解于水中，盛于已灭菌的玻璃瓶内，贮存于冰箱。B2.4.4完成培养基B2.4.4.1成分基础培养基100mL亚硫酸铋贮备液20mL柠檬酸铁煌绿贮备液4.5mLB2.4.4.2制法WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享16WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享加热融化基础培养基并冷却至50℃，同时分别加热亚硫酸铋贮备液和柠檬酸铁煌绿贮备液至50℃。在无菌操作下将后者加入到前者去，充分混合，无菌倾入已灭菌的培养皿中。B2.5三糖铁琼脂培养基（TSI培养基）B2.5.1成分蛋白胨20g牛肉膏5g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化钠5g硫酸亚铁铵0.2g硫代硫酸钠0.2g琼脂12g酚红0.025g蒸馏水1000mLB2.5.2制法将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，调pH到7.4。加入琼脂，加热煮沸，再加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃下灭菌15min。放置高层斜面备用。B2.6沙门氏菌诊断血清B3检验程序检验程序见图B。WORD文档下载可编辑专业技术资料分享污水样品处理：过滤污水样品处理：稀释WORD文档下载可编辑专业技术资料分享B4操作步骤B4.1样品处理和增菌增菌：将样品接种于二倍浓度SF37℃、培养24h平板分离：将增菌培养液分别接种于SS和BS37℃、培养24～48h平板分离：挑选可疑菌落接种于TSI37℃、培养18～24h鉴定：生化、血清学试验检验结果报告图B污水、污泥中沙门氏菌检验程序WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享17WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享B4.1.1污水取200mL污水，用灭菌滤膜进行抽滤。用100mL二倍浓度SF增菌液把滤膜上截留的杂质洗脱到灭菌三角烧瓶内，充公摇匀，置于37℃恒温培养箱，增菌培养12～24h。注：若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。B4.1.2污泥用灭菌匙称取污泥20g，放入灭菌容器内，加入200mL灭菌水，充分混匀，制成1：10混悬液。吸取上述1：10混悬液100mL，加入到装有100mL二倍浓度SF增菌液的已灭菌的三角烧瓶内，摇匀，置于37℃恒温培养箱，增菌培养24h。注：若样品为经过氯消毒的污泥，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。B4.2平板分离取上述增菌培养液，分别接种于SS培养基平板和BS培养基平板，置于37℃培养箱中，培养24～48h。观察各平板上生长的菌落形态。挑取在SS培养基平板上呈无色透明或中间有黑心，直径1～2mm的菌落；挑取在BS培养基平板上呈黑色的菌落或灰绿色的可疑肠道病原菌菌落。每个平板最少挑取5个菌落，接种于TSI培养基中，置于37℃培养箱中，培养18～24h。B4.3鉴定B4.3.1血清学试验在TSI培养基中，如不发酵乳糖，发酵葡萄糖产酸产气或只产酸不产气，一般产生硫化氢，有动力者，先与沙门氏A-F群O多价血清作玻璃片凝集，凡与多价O血清凝集者，再与O因子血清凝集，以确定所属群别，然后用H因子血清，确定血清型。双向菌株应证实两相的H抗原，有Vi抗原的菌型(伤寒和丙型副伤寒沙门氏菌)应用Vi因子血清检验。B4.3.2生化试验应进行葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖、靛基质、硫化氢、动力、尿素试验。沙门氏菌属中除伤寒沙门氏菌和鸡沙门氏菌不产气外，通过发酵葡萄糖、产气、均发酵甘露醇和麦芽糖(但猪沙门氏菌、雏沙门氏菌不发酵麦芽糖)，不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基质为阴性，通常产生硫化氢。除鸡、雏沙门氏菌和伤寒沙门氏菌的O型菌株无动力外，通常均有动力。如遇多价O血清不凝集而一般生化反应符合上述情况时，可加做侧金盏花醇、水杨素和氰化钾试验，沙门氏菌均为阴性。B5检验结果报告根据检验结果，报告一定体积的样品中存在或不存在沙门氏菌。WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享18WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享C1仪器和设备C1.1高压蒸汽灭菌器C1.2干燥灭菌箱。C1.3培养箱。C1.4恒温水浴箱。C1.5电炉。C1.6天平。C1.7灭菌平皿。C1.8灭菌刻度吸管。C1.9酒精灯。C2培养基和培养液附录C(规范性附录)医疗机构污水及污泥中志贺氏菌的检验方法WORD文档下载可编辑专业技术资料分享C2.1革兰氏阴性增菌液(GN增菌液)C2.1.1成分胰蛋白胨(或多价胨)20g葡萄糖1g甘露醇2g枸橼酸钠5g去氧胆酸钠0.5g磷酸氢二钾16g磷酸二氢钾2.5g氯化钠5g蒸馏水1000mLC2.1.2制法将以上各成分加入蒸馏水中溶化，调整pH至7.0，煮沸过滤，115℃下灭菌20min。贮存于冷暗处备用。C2.2二倍浓度革兰氏阴性增菌液(二倍浓度GN增菌液)C2.2.1成分除蒸馏水改为500mL外，其它成分同附录C2.1.1。C2.2.2制法制法同附录C2.1.2。C2.3SS培养基同附录B2.3。C2.4伊红美蓝琼脂培养基(EMB培养基)同附录A2.3。C2.5三糖铁琼脂(TSI培养基)同附录B2.5。C2.6志贺氏菌诊断血清C3检验程序检验程序见图C。WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享19WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享污水样品处理：过滤污水样品处理：稀释WORD文档下载可编辑专业技术资料分享C4操作步骤增菌：将样品接种于双倍浓度GN37℃、6～8h培养平板分离：将增菌培养液分别接种于SS和EMB37℃、培养24h平板分离：挑选可疑菌落接种于TSI37℃、培养18～24h鉴定：生化、血清学试验检验结果报告图C污水、污泥中志贺氏菌检验程序WORD文档下载可编辑专业技术资料分享C4.1样品处理和增菌培养C4.1.1污水取200mL污水，用灭菌滤膜进行抽滤。用100mL二倍浓度GN增菌液把滤膜上截留的杂质洗脱到已灭菌的三角烧瓶内，摇匀，置于37℃恒温培养箱，增菌培养6～8h。注：若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。C4.1.2污泥取污泥30g，放入灭菌容器内，加入300mL灭菌水，充分混匀制成1：10混悬液。吸取上述1：10混悬液100mL，加入到装有100mL二倍浓度GN增菌液的已灭菌的三角烧瓶内，搅匀，置于37℃恒温培养箱中，增菌培养6～8h。注：若样品为经过氯消毒的污泥，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。C4.2分离取上述增菌培养液，分别接种SS培养基平板和EMB培养基平板，置于37℃培养箱中培养24h。挑取在SS培养基平板和EMB培养基平板上呈无色透明，直径1～1.5mL的可疑肠道病原菌菌落。每个平板最少挑取5个菌落，接种于TSI培养基，置于37℃培养箱中培养18～24h。挑取在TSI中，葡萄糖产酸不产气，无动力，不产生硫化氢，上层斜面乳糖不分解的菌株，可做血清学和生化试验。C4.3鉴定C4.3.1血清学试验志贺氏菌属分为四个群，先与多价血清作玻璃片凝集试验，如为阳性，再分别与A、B、C、D群血清凝集，并进一步与分型血清做玻璃片凝集，最后确定其血清型。C4.3.2生化试验应进行葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖、靛基质、硫化氢、动力、尿素试验。志WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享20WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享贺氏菌属能分解葡萄糖，但不产气(福氏志贺氏菌6型有时产生少量气体)，一般不能分解乳糖和蔗糖，宋内氏志贺氏菌对乳糖和蔗糖迟缓发酵产酸。志贺氏菌属均不产生硫化氢，不分解尿素，无动力。对甘露醇、麦芽糖的发酵及靛基质的产生，则因菌株不同而异。如遇多价血清玻璃片凝集试验为阴性，而生化反应符合上述情况时，可加做肌醇、水杨酸、V-P、橼酸盐、氰化钾等试验。志贺氏菌属均为阴性反应。C5检验结果报告根据检验结果，报告一定体积的样品中存在或不存在志贺氏菌。附录D(标准的附录)医疗机构污泥中蛔虫卵的检验方法D1仪器和设备D1.1离心机。D1.2金属筛：60目。D1.3显微镜。D1.4恒温培养箱。D1.5高压蒸汽灭菌器。D1.6冰箱。D1.7振荡器。D2培养基和试剂D2.13%福尔马林溶液或3%盐酸溶液D2.2饱和硝酸钠溶液（比重1.38～1.40）或饱和氯化钠溶液D2.330%次氯酸钠溶液D3检验程序蛔虫卵检验程序见图D。蛔虫卵收集（分离）：加氢氧化钠溶液振荡蛔虫卵收集（水洗）：加蒸馏水离心倒去上清液蛔虫卵收集（漂浮）：加饱和硝酸钠溶液离心吸取上层浮膜蛔虫卵收集（沉淀）：加蒸馏水离心培养镜检：生死虫卵数检验结果报告图D污泥中蛔虫卵检验程序WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享21WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享D4操作步骤D4.1采样及样品处理样品采集后应立即送到实验室检验。若不能立即检验时，可在100g污泥中加入5mL3%福尔马林或3%盐酸溶液，在4～10℃冰箱内保存。若样品为经过氯消毒的污泥，应在现场取样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。D4.2蛔虫卵收集D4.2.1分离将100g污泥样品和50mL5％氢氧化钠溶液，分别注入三角烧杯内，置于振荡器上，以200～300次/min速度振荡30min，然后静置30min，以使蛔虫卵不再粘附在污泥上。D4.2.2水洗将上述样品分装在离心管内，以2000～2500转/min的转速离心5min。倒去离心管上部的液体，加入容量为沉淀物10倍的蒸馏水，混匀，以2000～2500转/min的转速离心5min，如此反复数次，直至沉淀物上面的液体接近透明。D4.2.3漂浮离心管内注入饱和硝酸钠溶液或饱和氯化钠溶液，搅匀，以2000～2500转/min的转速离心5min。注1：由于蛔虫卵的相对密度小于饱和硝酸钠溶液和饱和氯化钠溶液的相对密度，管内绝大多数的蛔虫卵会浮聚在液面上。注2：氯化钠溶液投加量以大于沉淀物量20倍为宜。注3：根据污泥性状，可以调整离心转速或时间。D4.2.4沉淀反复吸取管中浮膜转移至另一离心管中，加入10倍水量的蒸馏水，搅匀，以5000转/min的转速离心5min，慢慢吸去上清液。注：由于蛔虫卵比水的相对密度大，蛔虫卵将沉在管底内。D4.3培养在离心管中，加入2～3mL无菌的生理盐水或自来水和几滴3％福尔马林溶液，摇匀，转移至试管或直接置于24～26℃恒温箱，培养20天。培养中，若溶液量少于2mL时，应及时补充生理盐水或自来水。D4.4镜检培养后，将样品静置30mL后吸去试管内上层较浑浊的液体，加入约为沉淀物两倍量的蒸馏水或30％次氯酸钠溶液，混匀，在显微镜下计数死活蛔虫卵数。注1：活虫卵经过20天的培养会逐渐发育到幼虫期，而死虫卵则在同一条件下仍然保持单细胞期或停留于某一发育阶段，故可以区别。注2：30％次氯酸钠溶液能使虫卵最外层蛋白质壳逐渐溶解，便于在显微镜下清晰观察卵内的幼虫。D5蛔虫卵死亡率计算按下式计算蛔虫卵死亡率：mA=m+n×100公式中：A——蛔虫卵死亡率（%）；m——死亡蛔虫卵数；n——存活蛔虫卵数D6检验结果报告根据检验结果，报告100g污泥中蛔虫卵死亡率。WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享22WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享E1仪器和设备E1.1电炉。E1.2恒温水浴箱。附录E(规范性附录)医疗机构污水和污泥中结核杆菌的检验方法WORD文档下载可编辑专业技术资料分享E1.3高压蒸汽灭菌器。E1.4滤菌器。E1.5离心机。E1.6恒温培养箱。E1.7乙酸纤维膜：孔径为0.3～0.7μmE1.8玻璃漏斗G2：孔径为10～15μmE1.9玻璃漏斗G4：孔径为3～4μmE1.10酒精灯E2培养基和试剂：E2.1改良罗氏培养基E2.1.1成分磷酸二氢钾2.4g硫酸镁0.24g枸橼酸镁0.6g谷氨酸钠1.2g甘油12mL淀粉30g蒸馏水600mL鸡蛋液（包括蛋清和蛋黄）1000mL20%孔雀绿20mLE2.1.2制法将磷酸二氢钾、硫酸镁、枸橼酸钠、谷氨酸钠、甘油及蒸馏水混合于烧杯内，放在沸水浴中加热溶解。加入淀粉继续加热1h，摇动使其溶解，待冷却至50℃加鸡蛋液及孔雀绿，溶解，混匀。制成斜面，保持温度90℃，灭菌1h。E2.2小川氏培养基E2.2.1成分甲液：无水磷酸二氢钾1g味精1g蒸馏水100mL乙液：全蛋液200mL甘油6mL2%孔雀绿6mLE2.2.2制法甲、乙两液混合分装试管内。制成斜面，保持温度90℃灭菌1h。E2.3pH为7.0的磷酸盐缓冲液(M／15)E2.410％吐温(Tween)80水溶液加等量30％过氧化氢溶液。E2.54％硫酸溶液E3检验程序WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享23WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享结核杆菌检验程序见图E。污水集菌：过滤离心法或直接离心法污泥集菌：过滤离心法WORD文档下载可编辑专业技术资料分享E4操作步骤E4.1集菌培养：接种于罗氏培养基或小川氏培养基37℃、培养8周初步鉴定：对可疑菌落作抗酸染色，染色阳性者再作分离传代28℃、培养2～4周鉴定：致病力试验检验结果报告图E结核杆菌检验程序WORD文档下载可编辑专业技术资料分享污水集菌可采用过滤离心法或直接离心法,污泥集菌可采用过滤离心法。E4.1.1污水样品过滤离心法：用经煮沸消毒的乙酸纤维滤膜(孔径0.3～0.7μm)抽滤，安装严密后，取污水样500mL抽滤，根据悬浮物的多少，一份水样需更换数张滤膜，将同—份水样滤膜集中于小烧杯内。根据滤膜的多少用100～200mL4％硫酸溶液反复冲洗，静置30min后，收集洗液于离心管中，3000转／min，离心30min，弃去上清液，沉淀物中加1mL灭菌生理盐水混合均匀后，供接种用。直接离心法：水样500mL，分装于50mL或200mL灭菌离心管中，3000转／min，离心30min。同一份水样的沉淀物集中于试管内，加等量4％硫酸处理30min，供接种用。如体积过大，再次离心浓缩后接种。注：若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。E4.1.2污泥样品过滤离心法：取污泥10g加100mL蒸馏水冲洗过滤(滤纸漏斗)，再经玻璃漏斗G2(孔径10～15μm)和G4(孔径3～4μm)抽滤，最后经滤膜(孔径0.45～0.7μm)抽滤。取下滤膜，用4%硫酸3mL，充分振摇冲洗30min。注：若样品为经过氯消毒的污泥，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。E4.2接种污水的集菌液：全部接种于改良罗氏培养基或小川氏培养基培养管内斜面上，每支培养管接种0.1mL。污泥的集菌液：吸取两个0.1mL，分别接种于改良罗氏培养基或小川氏培养基培养管内斜面上。E4.3培养已接种的培养基置于37℃培养箱内培养。培养2周后开始观察结果，每周观察2次。WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享24WORD文档下载可编辑专业技术资料分享WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享一般需要培养8周。分离菌株：在罗氏培养基上呈淡黄色或无色的粗糙型菌落，作抗酸染色，阳性者作分离传代。分离传代菌株如生长速度在两周以上，则需作菌型鉴定；应用耐热触酶试验和传代培养于28℃培养2～4周，观察是否生长，用此方法即可进行初步鉴定。E4.4致病力试验耐热触酶反应阴性，28℃不生长之菌落为可疑结核杆菌。于小白鼠尾静脉接种lmg菌量(5mg／mL菌液，每只动物接种0.2mL)，死亡时观察病变或8周后解剖脏器发现典型结核病变者可确认为检出结核杆菌。其耐热触酶试验方法如下：取菌落3～5mg分散于0.5mL磷酸盐缓冲液中，置68℃水浴中20min后取出．冷却后加吐温80h和过氧化氢溶液混合液0.5mL。发生气泡为阳性，30min不产生气泡者为阴性。人型、牛型结核杆菌，胃分枝杆菌和海鱼分枝杆菌为阴性，其他非典型抗酸菌和非致病抗酸菌为阳性。人型、牛型结核杆菌在28℃培养不生长，胃分枝杆菌和海鱼分枝杆菌28℃培养能生长。E5检验结果报告根据检验结果，报告一定体积的样品中存在或不存在结核杆菌。附录F(规范性附录)医疗机构污水污染物（COD、BOD、SS）单位排放负荷计算方法F1水污染物单位排放负荷计算公式：L=C×Q/N式中：L---水污染物排放单位负荷（g/床.d）C---污染物排放浓度（mg/L）Q---日排水量（m3/d）N---床位数（床）WORD文档下载可编辑 专业技术资料分享25WORD文档下载可编辑